轉(zhuǎn)基因玉米Bt11標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERM-BF412dk是含有不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的轉(zhuǎn)基因玉米的五種Bt11玉米粉末認(rèn)證參考物質(zhì)(CRMs)之一。轉(zhuǎn)基因玉米Bt11標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERM-BF412dk應(yīng)用于食品和飼料中轉(zhuǎn)基因Bt11玉米的鑒定和定量方法的校準(zhǔn)或質(zhì)量控制。干的CRM粉具有吸濕性。

轉(zhuǎn)基因玉米Bt11標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERM-BF412dkddPCR方法穩(wěn)定性測定分析

以10 ng/μL的轉(zhuǎn)基因玉米Bt11標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)基因 組 DNA 為模板進(jìn)行 ddPCR，測定轉(zhuǎn)基因玉米 Bt11 品系穩(wěn)定性。ddPCR 擴(kuò)增反應(yīng)的熱點(diǎn)圖(圖 1)顯 示，ddPCR所獲得的陰性微滴和陽性微滴之間有明 顯的熒光信號差距，拖尾現(xiàn)象不嚴(yán)重，通過設(shè)置統(tǒng) 一的閾值線可進(jìn)行陰性和陽性反應(yīng)點(diǎn)的區(qū)分。各 微滴實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)分析(表3)顯示，3次重復(fù)擴(kuò)增 實(shí)驗(yàn)微滴數(shù)都大于 14 000，滿足泊松分布統(tǒng)計(jì)(有 效微滴數(shù)＞10000)的要求，說明實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì) 學(xué)意義。內(nèi)參基因 Zein 的 3 次重復(fù)實(shí)驗(yàn)基因拷貝 數(shù)分別為 161、160 和 166，平均拷貝數(shù)為 162.33， RSD 為 1.98%；Bt11 品系特異性基因的 3 次擴(kuò)增反 應(yīng)所得的拷貝數(shù)分別為86.20、81.30和83.90，平均拷貝數(shù)為83.80，RSD為2.93%。上述結(jié)果表明，本 方法中所用內(nèi)源和外源基因引物和探針的擴(kuò)增穩(wěn) 定性良好，可同時進(jìn)行轉(zhuǎn)基因玉米Bt11 品系特異 性序列及內(nèi)源基因的ddPCR檢測。

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